一、采樣前：明確需求并做好基礎準備

 

采樣前的規劃是保證效果的前提，需結合檢測目的（如環境監測、消毒效果評估、科研分析等）制定針對性方案。

 

1.合理選擇采樣器類型

 

不同原理的采樣器適用于不同場景和微生物特性，選擇匹配的類型是基礎：

 

撞擊式采樣器（如安德森級聯撞擊采樣器、裂隙撞擊采樣器）：通過高速氣流將微生物撞擊到培養基或捕集膜上，適用于需培養的活菌檢測（如菌落總數測定），尤其適合捕獲不同粒徑的微生物（級聯撞擊可區分氣溶膠粒徑分布）。

 

過濾式采樣器（如膜過濾采樣器）：利用濾膜（如聚碳酸酯膜、混合纖維素膜）截留微生物，適用于高靈敏度檢測（如qPCR定量、病毒檢測），或需同時分析微生物與顆粒物關聯的場景，但需注意濾膜材質對微生物活性的影響（如選擇低吸附性濾膜）。

 

沉降式采樣器（如平皿沉降法）：操作簡單但效率低，僅適用于粗略的環境微生物篩查（如潔凈室日常監測），不建議用于低濃度或小粒徑微生物采樣。

 

離心式采樣器：通過離心力分離微生物，適用于流動場景采樣（如車間、公共場所），優勢是體積小、便攜，但捕獲效率受氣流穩定性影響較大。

 

2.優化捕集介質選擇

 

捕集介質（培養基、濾膜、吸收液）直接決定微生物的捕獲效率和存活能力：

 

培養基選擇：根據目標微生物特性選用專用培養基（如檢測細菌用營養瓊脂，真菌用馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA，致病菌用選擇性培養基）；確保培養基新鮮（制備后4℃冷藏不超過7天）、厚度均勻（約3-5mm），避免干裂或污染。

 

濾膜選擇：優先選用低吸附、高孔隙率的濾膜（如聚四氟乙烯PTFE膜、硝酸纖維素膜），減少微生物因靜電或吸附導致的損失；濾膜孔徑需匹配微生物大小（通常選用0.22μm或0.45μm，病毒采樣可選用0.1μm濾膜）。

 

吸收液選擇：用于液體吸收式采樣器時，吸收液需兼顧“捕獲效率”和“微生物活性保持”（如用含0.05%-0.1%吐溫80的生理鹽水或緩沖液，降低微生物沉降和吸附；病毒采樣可添加牛血清白蛋白BSA保護病毒結構）。

 

3.避免采樣前污染

 

微生物采樣易受外界污染影響，需嚴格控制采樣前的“無菌環境”：

 

采樣器（如撞擊式采樣器的噴頭、濾膜夾、采樣管）需提前滅菌（高壓蒸汽滅菌121℃/20min，或干熱滅菌160℃/2h；塑料部件可用75%酒精擦拭后紫外滅菌30min）。

 

培養基、濾膜等捕集介質需在無菌條件下裝載（如超凈工作臺內操作），避免手部接觸或空氣暴露污染。

 

采樣前對采樣區域進行“預平衡”（如潔凈室采樣前關閉門窗30min，避免人員走動導致氣流擾動）。

 

二、采樣中：優化參數設置與操作規范

 

采樣過程中的參數控制和操作細節是提高捕獲效率的核心，需根據采樣器原理和環境條件動態調整。

 

優化核心采樣參數

 

根據采樣器類型和檢測需求，調整關鍵參數以最大化捕獲效率：

 

采樣流量：流量需與采樣器設計匹配（如安德森采樣器推薦流量28.3L/min，裂隙采樣器可設10-30L/min）。流量過低會導致小粒徑微生物（<5μm）捕獲不足；流量過高則可能因氣流沖擊導致微生物失活，或培養基飛濺。建議通過“流量校準儀”在采樣前校準流量（誤差控制在±5%以內）。

 

采樣時間：需平衡“捕獲量”與“微生物活性”。短時間采樣（5-15min）適用于高濃度環境（如污染車間），避免培養基過度濕潤或微生物過量堆積；長時間采樣（30-60min）適用于低濃度環境（如潔凈室、手術室），但需注意：撞擊式采樣器采樣時間不宜超過60min（避免培養基干燥），過濾式采樣器需防止濾膜堵塞（可通過預過濾去除大顆粒）。

 

采樣高度與位置：根據檢測目的確定采樣點：

 

環境監測：采樣高度為1.2-1.5m（與人呼吸帶平齊），每個區域設3-5個采樣點（均勻分布，避開墻角、通風口、污染源正上方）。

 

消毒效果評估：需在消毒前、消毒后分別在同一位置采樣，確保對比的一致性。

 

氣溶膠溯源：可在不同高度（如0.5m、1.5m、3m）設置采樣點，分析微生物垂直分布。

 

氣流穩定性控制：采樣時避免采樣器直接面對通風口、風扇或人員走動方向；必要時關閉局部通風設備，或使用防風罩固定采樣器，減少氣流擾動導致的采樣偏差。