一、準備工作

 

　　1.環(huán)境要求：將厭氧培養(yǎng)箱放置在干燥、通風良好、無振動的地方，確保氣源和電源連接正常。避免周圍存在易燃易爆物品，以防發(fā)生意外。

 

　　2.清潔與消毒：定期使用適當?shù)南緞┣鍧嵟囵B(yǎng)箱內(nèi)外表面，特別是操作臺、門把手等高頻接觸區(qū)域。可以使用0.1%苯扎溴銨溶液或2%甲醛液擦拭工作臺面及可能污染的死角，濕拖地面，保持培養(yǎng)箱的清潔衛(wèi)生。

 

　　3.檢查設備狀態(tài)：在每次使用前，仔細檢查儀器的各個部件是否處于良好的工作狀態(tài)，包括溫度控制器、傳感器、厭氧氣體入口、排氣閥和觀察窗等。確保設備各項設施完備，能夠正常運行。

 

　　二、操作過程

 

　　1.形成厭氧環(huán)境：

 

　　-根據(jù)使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室內(nèi)放入無毒塑料袋。

 

　　-開啟電源，打開溫度控制器，調(diào)節(jié)至所需的培養(yǎng)溫度。

 

　　-向操作室內(nèi)放入鈀粒（封閉）和干燥劑，同時放入美蘭指示劑（封閉），以監(jiān)測厭氧環(huán)境的形成。

 

　　-關緊取樣室內(nèi)外門，進行真空檢查，確保密封性良好。

 

　　-進行至少三次的氣體置換，第一次和第二次通常使用氮氣，第三次使用混合氣體（如N2:H2:CO2=85%:10%:5%），以排除操作室內(nèi)的空氣。

 

　　2.催化脫氧：打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧。一小時后打開美蘭指示劑觀察其變色情況，以確認操作室內(nèi)是否達到厭氧環(huán)境。

 

　　3.滅菌處理：開啟紫外線滅菌燈，對室內(nèi)進行滅菌處理。滅菌時間根據(jù)實際情況自定，但應確保充分滅菌，以減少微生物污染的風險。

 

　　4.菌種置入和培養(yǎng)：

 

　　-檢查并關閉取樣室的門，確保密封性。

 

　　-將菌種放入取樣室后，打開取樣室外門并關閉外門。取樣室充滿氮氣并更換三次，以確保厭氧條件。

 

　　-接種棒滅菌器的應用：使用鎳鉻電熱絲使電極短路以致變紅進行滅菌。

 

　　三、注意事項

 

　　1.操作規(guī)范：建立和遵循標準操作規(guī)程（SOP），確保每次實驗前凈化系統(tǒng)至少運轉1小時以上，同時開啟凈化臺和紫外燈。嚴格按照操作流程進行實驗，避免因操作失誤導致實驗失敗或污染。

 

　　2.無菌操作：操作人員在進入操作區(qū)域前，應穿戴無菌工作服、口罩和手套，確保個人衛(wèi)生。在操作過程中，應避免大幅度或快速動作，以免攪動空氣中的塵埃微粒。所有進入培養(yǎng)箱的物品必須經(jīng)過嚴格的表面消毒處理。

 

　　3.氣體管理：確保儀器內(nèi)的氣體供應穩(wěn)定，及時更換氣體瓶和厭氧指示劑等。在操作過程中，避免在開啟門的情況下進行操作，以免破壞厭氧環(huán)境。定期檢查氧氣、氫氣和二氧化碳氣體濃度，避免漏氣。

 

　　4.設備維護：定期檢查儀器的各個部件，包括溫度控制器、傳感器、厭氧氣體入口、排氣閥和觀察窗等，確保它們處于良好的工作狀態(tài)。及時維修和更換損壞的部件，以保證設備的正常運行。

 

　　5.環(huán)境監(jiān)測：定期監(jiān)測操作室內(nèi)的微生物污染情況，包括沉降菌落計數(shù)和浮游菌測定，以確保環(huán)境符合無菌標準。使用適當?shù)呐囵B(yǎng)基進行環(huán)境微生物監(jiān)測，如胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(TSA)，并在必要時加入中和劑，以避免假陰性結果。

 

　　通過遵循以上步驟和注意事項，可以最大限度地提高厭氧培養(yǎng)箱的使用效率和培養(yǎng)效果，為生物學研究提供可靠的實驗數(shù)據(jù)。